1.經(jīng)典的多肽固相合成法

多肽固相合成法通過將氨基酸固定在固相載體上，實(shí)現(xiàn)多肽鏈的逐步合成固相載體通常為高分子樹脂，如聚苯乙烯-苯二乙烯交聯(lián)樹脂、聚丙烯酰胺聚乙烯-乙二醇類樹脂及行生物等。這些樹脂需要導(dǎo)入反應(yīng)基團(tuán)，才能與氨基酸形成共價(jià)鍵。

2.投料與樹脂處理:

將樹脂加入固相合成儀中，用適當(dāng)?shù)娜軇?/span>(如DCM)溶脹樹脂然后抽干。使用DMF等溶劑洗滌樹脂，以去除雜質(zhì)洗滌結(jié)束后抽干備用

3.縮合反應(yīng):

將第一個(gè)氨基酸(通常從C端開始)用一定體積的DMF溶解，并加入縮合劑(如DCC、HBTU等)進(jìn)行活化。將活化后的氨基酸溶液投入固相合成儀中補(bǔ)充DMF至適當(dāng)反應(yīng)濃度，攪拌進(jìn)行縮合反應(yīng)。

4.脫除保護(hù)墓:

使用Kaiser試劑等檢測(cè)反應(yīng)程度，當(dāng)反應(yīng)結(jié)束后抽干溶劑。

用DMF洗滌樹脂，然后加入適當(dāng)?shù)膲A性溶液(如PIPDMF溶液)脫除氨基酸N端的保護(hù)基(如Fmoc基團(tuán))再次使用Kaiser試劑檢測(cè)脫保護(hù)反應(yīng)程度，反應(yīng)完畢后抽干溶劑并用DMF洗滌，準(zhǔn)備加入下一個(gè)氨基酸。

5.縮合循環(huán):

按照樹脂上預(yù)設(shè)的氨基酸序列，依次重復(fù)上述“脫保護(hù)→洗滌→活化氨基酸→投料→縮合-洗滌”的步驟，進(jìn)行縮合循環(huán)操作，直至完成所有氨基酸的連接，

出料與樹臘干燥:

合成結(jié)束后，用適當(dāng)?shù)娜軇?/span>(如IPA和DCM)交叉洗滌樹脂，完成樹脂的收縮。將樹脂出料至不銹鋼托盤等容器中。

在真空干燥箱中室溫于燥樹脂，干燥完畢后稱重并計(jì)算收率。

6.樹脂裂解與多肽純化

樹脂裂解:配置裂解液(通常包含TFA等強(qiáng)酸)并提前置冰柜中冷藏保存，將肽樹脂加入反應(yīng)釜中，加入預(yù)冷的裂解液，攪拌反應(yīng)以將多肽從樹脂上裂解下來。裂解結(jié)束后放出反應(yīng)液，抽濾除去樹脂并以TFA等溶劑洗滌。

多肽純化:將裂解液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中室溫濃縮至小體積。使用適當(dāng)?shù)某恋韯?如甲基叔丁基醚)使多肽析出，并通過離心、洗滌等步驟得到粗肽。使用高效液相色譜(HPLC)等方法對(duì)粗肽進(jìn)行純化，以去除雜質(zhì)并分離出目標(biāo)多肽。

7.樹脂裂解與多肽純化

濃縮、過濾與凍干:將純化后的多肽溶液旋蒸除去有機(jī)溶劑，得到濃縮的多肽溶液。對(duì)濃縮后的多肽溶液進(jìn)行無(wú)菌過濾。將過濾后的多肽溶液置于凍干機(jī)中，設(shè)定適當(dāng)?shù)纳郎爻绦蜻M(jìn)行凍干處理。凍干結(jié)束后取出多肽產(chǎn)品，進(jìn)行包裝、入庫(kù)等后續(xù)操作。

寫到最后:

杭州固拓生物科技有限公司定制多肽合成業(yè)務(wù):藥物肽、臨床肽、訂書肽、淀粉肽、醛肽、環(huán)肽、二硫鍵搭橋多肽、穿膜肽、各種抗菌肽、美容肽、磷酸化肽、PEG肽、偶聯(lián)BSA和KLH抗原肽、各類酸修飾多肽、各種胺類化合物修飾多肽(苯胺、異戊胺、二乙胺)、各類榮光標(biāo)記(FITC、FAM系列、DOTA、TAMRA系列、CY系列)同位素肽等。固拓生物所有產(chǎn)品僅限科研使用，不得用于人體，如有違反，后果自負(fù)。

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