蛋白質(zhì)純化是從組織、細(xì)胞或蛋白質(zhì)混合物中分離特定目的蛋白質(zhì)組分的過程。蛋白質(zhì)凈化不僅要促進(jìn)分離的蛋白質(zhì)具有很強(qiáng)的純度，還要保持蛋白質(zhì)的生物活性。因此，有必要根據(jù)不同的蛋白質(zhì)特性設(shè)計一種或多種組合凈化方案。蛋白質(zhì)凈化的主要策略是利用不同蛋白質(zhì)之間的相似性和差異。根據(jù)蛋白質(zhì)之間的相似性，可以去除非蛋白質(zhì)物質(zhì)，然后根據(jù)蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白分離出來。特別是隨著基因工程技術(shù)的快速發(fā)展，雖然許多蛋白質(zhì)是通過基因重組來表達(dá)的，但蛋白質(zhì)凈化的水平直接關(guān)系到蛋白質(zhì)的純度和活性。因此，蛋白質(zhì)凈化仍然是現(xiàn)代生物技術(shù)的一個重要課題。

目的

一方面，蛋白質(zhì)的分離和純化對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能的深入研究尤為重要，另一方面，蛋白質(zhì)的分離和純化也與蛋白質(zhì)的應(yīng)用效果直接相關(guān)。因此，蛋白質(zhì)純化在生物科學(xué)的研究和應(yīng)用中起著重要的作用，蛋白質(zhì)分離和純化技術(shù)也是生物工業(yè)的關(guān)鍵技術(shù)。

方式

蛋白質(zhì)凈化的原則是將目的蛋白質(zhì)以合理的效率、速率、收率和純度分離，同時保持其生物活性和化學(xué)完整性。主要步驟包括實驗材料的選擇、預(yù)處理、蛋白質(zhì)提取、蛋白質(zhì)粗分級、蛋白質(zhì)細(xì)分級和蛋白質(zhì)鑒定。

凈化過程中必須注意：1盡量減少對蛋白質(zhì)活性的影響，如防止酸堿度過高或過低、高溫和重金屬的影響；2. 在低溫條件下操作；3. 盡量保持樣品中蛋白質(zhì)含量的領(lǐng)先水平。

歸類

蛋白質(zhì)純化可根據(jù)純化方法的類型分為：

一、沉淀法，包括鹽沉積，利用鹽離子破壞蛋白質(zhì)表面凝固層，暴露疏水區(qū)，然后沉積，達(dá)到初步凈化的目的；有機(jī)沉積，利用有機(jī)溶劑降低水活性，破壞蛋白質(zhì)表面凝固膜，導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀。沉淀法是一種溫和的凈化方法，但純度不高，可作為初級凈化過程。

二、透析法，包括透析袋和超濾法。通過透析和超濾，可以消除小分子雜質(zhì)，也可以更換蛋白質(zhì)溶液。

三、層析法包括分子篩凝膠層析、離子交換層析、親和層析（金屬鰲合親和層析、蛋白A/G層析、受體蛋白、底物等）、疏水層析、反向?qū)游龊透咝б合喾?。為了達(dá)到更好的效果，往往需要兩種層析方法的結(jié)合，如親和層析和離子交換層析的結(jié)合。

除上述方法外，還有許多其他凈化方法，如密度梯度離心法適用于高純蛋白的生產(chǎn)，但需要較高的實驗條件；蛋白晶體適用于生物結(jié)構(gòu)分析，如X透射學(xué)。

寫到最后:

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