1. 親和素(avidin, AV)還是鏈霉親和素(streptavidin, SA)?

雖然親和素(avidin,AV)與鏈霉親和素(streptavidin,SA)對生物素(Biotin)在某些應用中，親和素的結合具有很高的親和力(avidin,AV)主要問題是它的非特異性組合，這是由于親和素造成的(avidin,AV)糖鏈和高等電點的結構(pI)。因此，使用鏈霉親和素(streptavidin,SA)它可以顯著防止這種非特異性，或者使用相同的生物素來保留它(Biotin)結合脫糖化親和素的性質(avidin,AV)這種非特異性也可以預防。

2.使用鏈霉親和素(streptavidin,SA)-生物素(Biotin)作為多功能檢測系統(tǒng).

鏈霉親和素系統(tǒng)生物素(Biotin-Streptavidin-System)在將抗體共軛連接到生物素的幫助下(Biotin)使用親和素(avidin,AV)或鏈霉親和素(streptavidin,SA)其檢測方法幾乎可以應用于任何免疫測定。它可以與各種廉價、高質量的商業(yè)熒光染料或酶相連。這使得生物素化抗體具有信號放大和靈敏度增加的優(yōu)點，但同時也需要優(yōu)化抗體和共軛連接溶劑。

3.使用生物素化抗體時，選擇合適的緩沖系統(tǒng).

強烈建議在封閉緩沖液等溶液中避免使用胎牛血清，以防止高背景和低信噪比(fetalbovineserum,FBS)和生物素(Biotin)。一個好的替代品是0.1%–2.0%牛血清蛋白蛋白(BSAfractionV)。在Westernblot中，脫脂奶粉或酪素(casein)由于殘留的生物素，應限制在初始封閉步驟中(Biotin)會干擾檢測。在這種情況下，抗體溶液應與硝酸纖維素膜和PVDF膜兼容，TBS-吐溫(TBS-Tween)中制備。如果這個時候高背景還是個問題，0.2%的高純度–6%酪素(casein)這個結果可以改善。

4.減少樣品中殘留生物素的干擾.

有時使用生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)(Biotin-Streptavidin-System)當時，Westernblot可能會檢測到非特異性條帶。這對于組織制備和細胞裂解物來說是一個特殊的事實，因為它們可能含有共價結合生物作為輔助因素的酶。在這種情況下，增加緩沖溶液的離子強度(~0.5MNaCl)和/或在與一抗共孵化前進行生物素(Biotin)封閉是有用的。在這種情況下，使用鏈霉親和素(streptavidin,SA)瓊脂糖微球去除生物素(Biotin)能顯著提高生物素化酶的靈敏度。

5.用于蛋白質定量細胞表面的生物素化.

鏈霉親和素系統(tǒng)生物素(Biotin-Streptavidin-System)在無創(chuàng)技術中成功地用于化學標記細胞表面蛋白，從而表達細胞表面和吞咽細胞的作用(endocytosis)以及一系列細胞質膜受體和抗原的直接和準確的定量檢測。生物素與特異性受體和抗原相結合(Biotin)使用ELISA或Westernblot定量檢測數(shù)量。該技術是一種快速、安全的放射性標記技術替代方法。

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