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長肽合成的難題與解決方法
作者:固拓多肽合成公司    發(fā)布于:2023年04月10日
摘要:長肽合成技術(shù)在生物學的研究中,一般會使用序列較長的多肽,針對序列中含60個以上氨基酸的多肽,一般會采取基因表達及SDS-PAGE法來獲取,不過此方法時間長,最終生成物分離效果不佳等,使固相法長肽合成技術(shù)成了一種需求。


在生物學的研究中,一般會使用序列較長的多肽,針對序列中含60個以上氨基酸的多肽,一般會采取基因表達及SDS-PAGE法來獲取,不過此方法時間長,最終生成物分離效果不佳等,使固相法長肽合成技術(shù)成了一種需求。

長肽合成面臨的挑戰(zhàn)及解決方案

長肽合成中,我們始終面臨著一個問題,即合成中伴隨序列的增長,縮合反應(yīng)空間位阻增大,想要反應(yīng)徹底,需要調(diào)整反應(yīng)時間;不過隨著反應(yīng)時間變長,其所產(chǎn)生的副反應(yīng)也就越多,一部分缺殘基的目標肽就繼而形成。這種缺殘基的肽鏈都是長肽合成環(huán)節(jié)中所產(chǎn)生的關(guān)鍵雜質(zhì)。故此,長肽的合成環(huán)節(jié)中,我們必須攻克的關(guān)鍵難題是探究高品質(zhì)的反應(yīng)條件和反應(yīng)方法,進而使氨基酸縮合反應(yīng)開展的更全面更充分。另外減短反應(yīng)時間,正因為反應(yīng)時間越長,不可控的副反應(yīng)相對也就越多,副產(chǎn)物就越來越復雜。因此,總結(jié)了以下三點:

可以采用微波合成法:針對合成過程中遇到的一部分不易整體縮合的氨基酸,可以采用微波法進行合成,這種方法成效顯著,并且大大減少了反應(yīng)時間,并減少了兩種關(guān)鍵副產(chǎn)物的形成。

長肽合成的難題與解決方法

可以采用片段合成法:當一些多肽用常見合成方法合成很困難,并且不易純化時,我們可以采用將多肽中某段的某幾個氨基酸整體縮合以后當作一個整體縮合到肽鏈上,此方法也可以解決很多合成中出現(xiàn)的問題。

可以采用酰肼合成法:酰肼法合成多肽的方法是固相合成的N末端Cys多肽和C末端多肽酰肼之間的化學選擇性反應(yīng)形成酰胺鍵來實現(xiàn)多肽相連的方法。這種方法依據(jù)肽鏈中Cys的位置,將整個肽鏈分為多條序列分別合成,最終通過液相合縮反應(yīng)得到目標肽,這種方法不但大大減少了長肽合成時長,并且明顯地增加了最終生成物純度,故此廣泛運用于含有Cys的長鏈多肽的合成。

長肽純化

長肽的特殊性不可避免而導致所得到的粗品肽組分繁雜,故此,針對長肽的HPLC純化也是一個挑戰(zhàn);通過在amyloid系列多肽純化環(huán)節(jié)中,汲取大量經(jīng)驗并成功用以長肽純化,通過采用新型設(shè)備,多純化體系混用,重復分離等經(jīng)驗手段,大幅提升了我們長肽純化成功率。

寫到最后:

杭州固拓生物科技有限公司定制多肽合成業(yè)務(wù):藥物肽、臨床肽、訂書肽、淀粉肽、醛肽、環(huán)肽、二硫鍵搭橋多肽、穿膜肽、各種抗菌肽、美容肽、磷酸化肽、PEG肽、偶聯(lián)BSA和KLH抗原肽、各類酸修飾多肽、各種胺類化合物修飾多肽(苯胺、異戊胺、二乙胺)、各類榮光標記(FITC、FAM系列、DOTA、TAMRA系列、Cy系列)同位素肽等。

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