近期，將來(lái)技術(shù)學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程系陳匡時(shí)教授課題組根據(jù)雙分子熒光互補(bǔ)（BimolecularFluorescenceComplementation，BiFC）技術(shù)，發(fā)展了一種還可以在納米限度下科學(xué)研究體細(xì)胞內(nèi)蛋白相互作用的新型顯像技術(shù)。該技術(shù)克服了傳統(tǒng)式BiFC技術(shù)易造成假陽(yáng)性數(shù)據(jù)信號(hào)的難題，并被用來(lái)在納米限度下分析宿主細(xì)胞關(guān)鍵蛋白參加HIV-1病毒組裝的工作模式。該科研成果已發(fā)布于學(xué)術(shù)刊物ACSNano，題型為“ABackgroundAssessableandCorrectableBimolecularFluorescenceComplementationSystemforNanoscopicSingle-MoleculeImagingofIntracellularProtein-ProteinInteractions”。

BiFC技術(shù)是一種可在人體細(xì)胞內(nèi)顯像蛋白相互作用的方式 ，其基本原理是將一個(gè)完全的熒光蛋白切分成2個(gè)非熒光精彩片段，再將這兩個(gè)非熒光精彩片段各自與將會(huì)產(chǎn)生相互作用的2個(gè)總體目標(biāo)蛋白聯(lián)接產(chǎn)生融合蛋白，當(dāng)總體目標(biāo)蛋白在人體細(xì)胞內(nèi)相互作用時(shí)，這兩個(gè)非熒光精彩片段會(huì)因?yàn)槭覂?nèi)空間間距的挨近產(chǎn)生完善的熒光蛋白。殊不知，在總體目標(biāo)蛋白不產(chǎn)生相互作用的情形下，2個(gè)非熒光精彩片段也有可能因?yàn)槿我馀鲎捕越M裝成完全的熒光蛋白，造成假陽(yáng)性數(shù)據(jù)信號(hào)，這限定了BiFC技術(shù)對(duì)總體目標(biāo)蛋白相互作用的定量分析法。為了更好地克服這一難題，陳匡時(shí)課題組研發(fā)了一種可以檢驗(yàn)并解決這類由非熒光精彩片段自組裝造成的假陽(yáng)性數(shù)據(jù)信號(hào)的方式 ，并將其取名為BAC-BiFC（BackgroundAssessableandCorrectable-BimolecularFluorescenceComplementation）（圖1）。從總體上，她們給BiFC中的一個(gè)總體目標(biāo)蛋白聯(lián)接上一個(gè)參照熒光蛋白，該參照熒光蛋白不但可以用來(lái)表現(xiàn)總體目標(biāo)蛋白在人體細(xì)胞內(nèi)的體現(xiàn)程度與空間布局，還促使研究者能夠根據(jù)比例顯像分辨不一樣基因表達(dá)水準(zhǔn)下假陽(yáng)性數(shù)據(jù)信號(hào)的高低，進(jìn)而得到 不會(huì)受到假陽(yáng)性信號(hào)干擾的試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。

“根據(jù)發(fā)展新的超分辨BiFC技術(shù)，大家發(fā)覺(jué)宿主細(xì)胞AGO2蛋白參加了HIV-1病毒顆粒組裝的整個(gè)過(guò)程，是病毒增殖不可或缺的原件。這一發(fā)覺(jué)有希望為HIV病毒和別的逆轉(zhuǎn)錄病毒的分析給予新的角度。”陳匡時(shí)表明。

在HIV-1病毒的增殖全過(guò)程中，其結(jié)構(gòu)蛋白Gag需要與眾多宿主細(xì)胞蛋白產(chǎn)生相互作用以進(jìn)行病毒顆粒的組裝與發(fā)芽。研究者運(yùn)用BAC-BiFC技術(shù)，在納米限度下對(duì)Gag蛋白與宿主細(xì)胞蛋白AGO2中間的相互作用開展了科學(xué)研究【根據(jù)融合超分辨率顯微鏡技術(shù)directstochasticopticalreconstructionmicroscopy（dSTORM）完成】。與先前的分析結(jié)果不一樣，研究者發(fā)覺(jué)Gag蛋白并不是只受體病毒顆粒包裝固定不動(dòng)數(shù)量的AGO2，只是在病毒組裝后期招募了大量的AGO2（圖2），這提醒AGO2參加了HIV-1病毒顆粒組裝的整個(gè)過(guò)程，是病毒增殖不可或缺的原件。這一發(fā)覺(jué)有希望為HIV-1病毒和別的逆轉(zhuǎn)錄病毒的分析給予新的角度。值得一提的是，除開本工作所涉及到的研究對(duì)象外，BAC-BiFC技術(shù)也具備對(duì)生命歷程中其它各類蛋白相互作用甚至其它生物分子中間的相互作用開展可視化科學(xué)研究的發(fā)展?jié)摿Α?/span> 

 寫到最后：

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